La Inmaculada Concepción representa a María como único ser mortal que se libró del pecado original. Este es un argumento doctrinal católico de larga tradición, muy representado en la pintura española del Siglo de Oro. María aparece de pie sobre cinco querubines que ocupan media luna. Luce un collar con el anagrama A[ve] M[aría], mientras una multitud de estrellas y de angelitos se confunden en medio de las nubes en la aureola que le rodea la cabeza. A los lados hay dos ángeles con lirios, rosas (atributos de pureza) y tablas con inscripciones del "Cantar de los cantares". A los lados, aparecen dos colegiales y símbolos que se atribuyen a María: Espejo sin mancha, Escala de Jacob, Puerta del cielo y Estrella de la mañana. Zurbarán hizo varias versiones de este tema, pero ésta es, sin duda, la mejor.